Блок фбс 5 размеры: Купить ФБС 5 от Амега-Бетон в Уфе по низким ценам

Содержание

цены, размеры ФБС 24 6, 24 4 – МЕТАЛЛОМАРКЕТ в Москве

Стеновые блоки ФБС: цены, размеры ФБС 24 6, 24 4 – МЕТАЛЛОМАРКЕТ в Москве

О компании
- О нас
- Отзывы
- Вакансии
- Договор поставки
Каталог
- Металлопрокат
- Водосточная система
- Алюминиевый профиль
- ЖБИ
- Нержавеющий прокат
- Строительные материалы
- Металлообработка
- Марки стали
Доставка
Заказ металла
Оплата
Контакты

Внимание! В связи с изменениями цен на рынке металлопроката, точную стоимость продукции уточняйте у менеджеров.

ОПЛАТИТЬ ЗАКАЗотплата строго по выписанному у менеджера счету

Фундаментные блоки — это ЖБИ изделия, которые изготавливаются из тяжелых марок бетона, плотностью 2200 кг/м3;. У них достаточно высокая прочность и плотность, поэтому их применяют в несущих конструкциях с большими нагрузками. Фундаментные блоки ФБ используют для устройства фундаментов и цокольных этажей, а также в качестве строительного материала для стен подвальных и подземных помещений.

Так же фундаментные блоки нашли широкое применение в частном строительстве. Некоторые виды фундаментных блоков дополнительно усиливаются арматурой. Они имеют специальные петли для удобной транспортировки и пазы для раствора.

Стеновые фундаментные блоки имеют следующие стандартные размеры:

высота — 300, 600 мм;
ширина – 300, 400, 500 и 600 мм;
длина – 600, 800, 900, 1200 и 2400 мм.

Блоки ФБС имеют свою маркировку, обозначающуюся набором букв и цифр.

Например: блок ФБС 24-6-6 т. Эта маркировка обозначает фундаментный блок стеновой, длиной – 2400 мм, шириной 600 мм и высотой 600 мм, а буква «т» говорит о том, что блок изготовлен из тяжелого бетона.

Наименование	L, см	B, см	H, см	Масса, кг	Уточнить цену
СКЦ-1	40	20	20	40
ФБС-9-З-6т	88	30	58	350
ФБС-9-4-3т	88	40	28	220
ФБС-9-4-6т	88	40	58	470
ФБС-9-5-3т	88	50	28	280
ФБС-9-5-6т	88	50	58	590
ФБС-9-6-3т	88	60	28	350
ФБС-9-6-6т	88	60	58	700
ФБС-12-3-3	118	30	28	264
ФБС-12-З-6т	118	30	58	460
ФБС-12-4-Зт	118	40	28	310
ФБС-12-4-6т	118	40	58	640
ФБС-12-5-Зт	118	50	28	390
ФБС-12-5-6т	118	50	58	790
ФБС-12-6-Зт	118	60	28	460
ФБС-12-6-6т	118	60	58	960
ФБС-24-3-6т	238	30	58	970
ФБС-24-4-6т	238	40	58	1300
ФБС-24-5-6т	238	50	58	1630
ФБС-24-6-6т	238	60	58	1960

Ассортимент продукции постоянно обновляется
Постоянным клиентам скидки и бонусы
Услуги автокрана и автотранспорта

Специальные предложения

все предложения

Некондиция

Некондиция: Профнастил оцинкованный (Zn) и окрашенный (RAL, цвета: 3005, 5005, 8017, 7004) — С 8, С 20, гофролист. Длина — 2,0 метра. Толщина металла от…

Лист перфорированный

Стальной

Оцинкованный

Нержавеющий

Алюминиевый

Обрабатываем металл по вашим заявка

Режем, гнем, красим, сверлим, варим ООО «Металломаркет» сообщает, что теперь, для удобства своих клиентов мы режем и обрабатываем металл (гнем, красим,…

Порошковая покраска металлоконструк

Компания МЕТАЛЛОМАРКЕТ рада предложить услуги покраски в полимерное покрытие лист оцинкованный толщиной от 0,35 мм. до 0,9 мм (ширина стандартная 1250 мм.).

Отзывы о нас

все отзывы

GQ Россия

Редакция журнала GQ Россия выражает благодарность компании ООО «Металломаркет» за помощь в проведении съемки часов для номера GQ декабрь 2019.

С уважением, Анастасия Чибиисова (Продюсер GQ).

Художественная школа

Федеральное государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение «Московская центральная художественная школа при Российской академии художеств» выражает благодарность специалистам и руководство компании ООО «Металломаркет» за оказание услуг в области поставок материала.

Более двух лет эта компания является нашим надежным поставщиком. Специалисты в срок, без задержек поставляют нужную нам продукцию.

Готовы в любое время оперативно отреагировать и привезти нужные нам материалы.

Отдельное спасибо сотрудникам ООО «Металломаркет» за вежливость и аккуратное ведение документации.

Надеемся на дальнейшее сотрудничество. Желаем дальнейшего процветания и развтия.

С уважением, директор Д.В. Губанов

Наши поставщики

каталог «Профнастила для забора»

Металлопрокат

Листы перфорированные
Просечно-вытяжной лист
Защитные ограждения
Оцинкованный лист
Профнастил
Балка
Квадрат
Круг
Полоса
Лист рифленый
Лист х/к
Лист г/к
Сетка металлическая
Трубы ВГП
Трубы профильные
Трубы электросварные
Уголки
Швеллер
Доборные элементы

Водосточная система

Алюминиевый профиль

Труба квадратная
Труба круглая
Труба прямоугольная
Алюминиевые тавры
Алюминиевый уголок
Алюминиевая шина

ЖБИ

Асбестоцементные изделия

Стеновые блоки ФБС
Балки железобетонные
Камни бордюрные
Лотки
Марши лестничные
Опоры
Перемычки

Нержавеющий прокат

Нержавеющие листы
Перфорированный лист
Лист из нержавейки рифленый
Нержавеющий квадрат
Нержавеющая полоса
Сетка из нержавейки
Нержавеющие трубы
Нержавеющий круг
Нержавеющий швеллер
Нержавеющая балка
Нержавеющий угол

Металлообработка

Лазерная резка металла в «МЕТАЛЛОМАРКЕТ»
Изготовление металлоконструкций на заказ
Сверление
Резка и раскрой
Сварка
Гибка металла
Порошковая окраска
Цинкование изделий
Пробивка металла

Марки стали

ФБС 24-5-6 т по стандарту: ГОСТ 13579-78

увеличить изображение

Стандарт изготовления изделия: ГОСТ 13579-78

Фундаментные блоки сплошные ФБС 24-5-6 т

Фундаментные блоки ФБС 24-5-6 т

1.Варианты написания маркировки.

Обозначение фундаментных блоков ФБС 24-5-6 т осуществляется согласно ГОСТ 13579-78 и включает две группы: буквенная – тип изделия, цифровая – размеры и класс по прочности. Написание маркировки производится следующими вариантами (ошибки в любом случае – нет):

1. ФБС 24-5-6 т т ;

2. ФБС 24-5-6 т п ;

3. ФБС 24-5-6 т ш ;

4. ФБС 24-5-6 т с ;

2.Основная сфера применения.

Блоки сплошного сечения ФБС 24-5-6 т используются для строительства сборных фундаментов для зданий различного назначения. Это могут быть как жилые дома, так и производственные строения. Блоки данного вида могут быть использованы и для дачного строительства, где заливка фундаментной конструкции не может быть произведена вручную. За счет особой формы этих железобетонных изделий строительство объекта сокращается по срокам вдвое.

Технология укладки блоков ФБС 24-5-6 т в качестве фундамента и стен подвального или технического подземного помещения полностью оправдывает себя на практике, как наиболее простая и быстровозводимая. Подвалы могут иметь различную глубину.

Фундаментные блоки ФБС 24-5-6 т

3.Обозначение маркировки изделий

Фундаментные блоки сплошного сечения ФБС 24-5-6 т маркируют согласно ГОСТ 13579-78. В группе обозначений указывают тип изделия, размерный ряд. Габаритные размеры блока составляют 2380х500х580 , где соответственно указаны длина, ширина и высота.

ФБС 24-5-6 т

1. ФБС – фундаментный блок сплошной;

2. 24 – длина, указывается в дц.;

3. 5 – ширина, указывается в дц.;

4. 6 – высота, указывается в дц.

Дополнительные данные для характеристики фундаментных блоков сплошного сечения:

1. Масса – 1630 ;

2. Геометрический объем изделия – 0,6902 ;

3. Объем бетона, расходуемый на один элемент – 0,68 ;

Маркировочные знаки, дата изготовления и вес изделий должны быть нанесены на торцевую грань несмываемой черной краской. Дополнительно может быть указан товарный знак компании-производителя.

4.Основные материалы для изготовления и характеристики.

В качестве основного материала для изготовления блоков сплошного сечения ФБС 24-5-6 т используется пористый бетон. Это прочный и долговечный материал, который проявляет высокие свойства стойкости к действию различных сред. Пористая структура изделий обеспечивает их высокую теплопроводность. Малый вес позволяет не обустраивать внушительное основание для фундамента. Высокая несущая способность (могут быть построены стены в 1,5 кирпича) значительно расширяет сферу использования фундаментных блоков сплошного сечения. Так как «работа» производится под действием постоянных сдавливающих и сжимающих деформаций, блоки должны быть армированы. Плотность должна соответствовать величине – не менее чем 1800 кг/м3. Марка по прочности на сжатие должна соответствовать пределам М100, допускается применять марки М50 и М200. Бетон должен также отвечать требованиям по водонепроницаемости и морозостойкости (температурный диапазон достигает до -70 градусов), так как эксплуатация осуществляется в достаточно жестких условиях. Не допускается к закладке в фундамент элементов с трещинами, наплывами, сколами и торчащими элементами арматурной сетки. Армируется в редких случаях, используется стальная углеродистая проволока класса А1 и А111. Подобные дефекты снижают несущую способность готового элемента и приводят к его быстрой негодности (под действием пучения грунтов и в условиях постоянного действия грунтовых вод). На выходе блок ФБС 24-5-6 т должен соответствовать заявленным качествам согласно ГОСТ 13579-78.

5.Хранение и транспортировка.

Хранение блоков сплошных ФБС 24-5-6 т производится в штабелях. Послойно укладывают деревянные подкладки. Под штабель обустраивается щебенчато-песчаная подушка. Предпочтительна сортировка по видам и сортам изделий. Транспортирование железобетонных блоков для фундаментов производится посредством спецтранспорта с надежным закреплением каждого изделия. Не допускается перегрузка транспорта, обязательно учитывается грузоподъемность машины.

Уважаемые покупатели! Сайт носит информационный характер. Указанные на сайте информация не являются публичной офертой (ст.435 ГК РФ). Стоимость и наличие товара просьба уточнять в офисе продаж или по телефону 8 (800) 500-22-52

блокирующих буферов для вестерн-блоттинга и ELISA | Thermo Fisher Scientific

Перед использованием антител для обнаружения белков, которые были нанесены точками или перенесены на мембрану, необходимо заблокировать оставшуюся связывающую поверхность, чтобы предотвратить неспецифическое связывание антител. В противном случае антитела или другие реагенты для обнаружения будут связываться с любыми оставшимися сайтами, которые первоначально служили для иммобилизации представляющих интерес белков. В принципе, для блокирования можно использовать любой белок, который не обладает аффинностью связывания с целевым белком или компонентами зонда (антителами) в анализе. На практике, однако, некоторые белки работают лучше, чем другие, потому что они более последовательно связываются с мембраной или другой поверхностью иммобилизации или потому что они стабилизируют функцию других компонентов системы.

Исследование: блокирующие буферы вестерн-блоттинга Протоколы вестерн-блоттинга

Содержание страницы

Назначение и функция шагов блокировки
Типы буферов блокировки
Какой буфер блокировки использовать?

Назначение и функция блокирующих ступеней

Мембранные носители, такие как нитроцеллюлоза и поливинилидендифторид (ПВДФ), используемые в вестерн-блоттинге, обладают высоким сродством к белкам. Чтобы предотвратить неспецифическое связывание детектирующих антител на этапах после переноса, незанятые участки на поверхности мембраны должны быть заблокированы. Составы блокирующих буферов сильно различаются и могут содержать молоко, обычную сыворотку или высокоочищенные белки для блокирования свободных участков мембраны. Этап блокировки является обязательным и улучшает отношение сигнал-шум анализа за счет уменьшения фоновых помех. Недостаточное количество блокиратора приводит к чрезмерному фоновому шуму и снижению отношения сигнал/шум; напротив, чрезмерные концентрации блокатора могут маскировать взаимодействия антитело-антиген или ингибировать фермент-маркер, что вызывает снижение сигнала-мишени.

Типы блокирующих буферов

Несколько типов блокирующих буферов успешно используются в вестерн-блоттинге. Большинство блокирующих буферов для вестерн-блоттинга представляют собой инертные растворы либо смешанных белков, либо одного очищенного белка, которые в идеале практически не взаимодействуют с определяющими антителами или антигенами на блоте. Как правило, блокирующие агенты разводят либо в солевом растворе с трис-буфером (TBS), либо в фосфатно-солевом буфере (PBS) с детергентом или без него. Детергенты, такие как Tween-20, могут быть добавлены в блокирующий буфер для дальнейшего снижения неспецифического связывания. Количество Tween-20 (0,05%-0,2%) будет варьироваться в зависимости от силы используемых антител. Слабосвязывающиеся антитела могут быть смыты слишком большим количеством моющего средства при последующих промывках.

Blocking Buffer/Agent	Benefits	Considerations
2-5% Non-fat milk	Inexpensive, contains multiple types of proteins	Contains biotin and phosphoproteins, which can interfere with streptavidin-biotin стратегии обнаружения и обнаружения фосфорилированных белков-мишеней. Из-за большого количества белков в молоке молоко может маскировать некоторые антигены и снижать предел обнаружения вестерн-блоттинга.
2-3% бычий сывороточный альбумин (БСА)	Хорошая альтернатива молоку, может использоваться в биотин-стрептавидиновых системах или при поиске фосфопротеинов	В продаже имеются различные сорта БСА, которые могут влиять на отношение сигнал/шум . BSA, как правило, является более слабым блокатором, что может привести к более неспецифическому связыванию антител, но может увеличить чувствительность обнаружения белков с низким содержанием.
Очищенные белки (например, казеин)	Буферы, блокирующие один белок, могут обеспечить меньшую вероятность перекрестной реакции с компонентами анализа, чем растворы сыворотки или молока. Идеально, когда блокаторы, такие как обезжиренное молоко, блокируют связывание антиген-антитело	Дороже, чем традиционные рецептуры обезжиренного молока.

Какой блокирующий буфер использовать?

Выбор блокирующего буфера для вестерн-блоттинга часто зависит от системы. Определение правильного блокирующего буфера может помочь увеличить отношение сигнал/шум в системе. Иногда при переключении с одного субстрата на другой может потребоваться изменение блокирующего буфера, чтобы избежать проблем со снижением сигнала или усилением фона. Например, при применении конъюгата щелочной фосфатазы (ЩФ) следует выбирать блокирующий буфер в трис-буферном солевом растворе (ТБС), поскольку фосфатно-солевой буфер (ФСБ) препятствует активности ЩФ. Эмпирическое тестирование различных блокирующих буферов для использования с данной системой может помочь в достижении наилучших возможных результатов. Ни один блокирующий агент не подходит для любого применения, поскольку каждая пара антитело-антиген имеет уникальные характеристики.

Прилагаемые рисунки иллюстрируют ценность тестирования различных блокирующих буферов в рамках оптимизации вестерн-блоттинга. В этих примерах экспериментов, в которых все остальные условия были одинаковыми, различные блокирующие буферы подавляли или повышали чувствительность и специфичность вестерн-блоттинга для отдельных белков. В других случаях слабые блокирующие буферы могут вызывать появление неспецифических полос.

Нажмите на изображение, чтобы увеличить его

Сравнение 2% BSA, 5% NF-Milk и блокирующего буфера StartingBlock при обнаружении pAKT. Метод. Серию разведений лизата клеток 293T, начиная с 10 мкг/лунку, наносили на гели Bolt 4–12% Bis-Tris-Plus и подвергали электрофорезу при 200 В в течение ~20 мин. Гели переносили на нитроцеллюлозные мембраны с помощью устройства для переноса геля iBlot 2 (протокол P0 в течение 7 мин). Иммуноблотинг обрабатывали с использованием автоматизированного процессора вестерн-блоттинга Bandmate. Мембраны блокировали либо 2% BSA (PBS), 5% обезжиренным молоком (PBS), либо блокирующим буфером StartingBlock. Мембраны исследовали с помощью Rabbit Anti-pAKT (1:1000, № по каталогу MA5-149).16) разводят соответствующим блокирующим буфером. За этим последовала инкубация с HRP-конъюгированным козьим антикроличьим IgG (1:2500 или 0,04 мкг/мл, № по каталогу 32460). Детекцию хемилюминесценции проводили с использованием хемилюминесцентного субстрата SuperSignal West Pico PLUS. Мембраны визуализировали в системе визуализации iBright.

При обнаружении pAKT в лизатах клеток 293T 2% BSA и блокирующий буфер StartingBlock обеспечивали самую высокую чувствительность. Однако 2% БСА слабо блокировал неспецифическое связывание детектирующих антител, что видно по неспецифическим полосам при более высокой общей нагрузке лизатом. 5% NF-Milk обеспечивает самый низкий фон, но цена достигает предела обнаружения.

Нажмите на изображение, чтобы увеличить

Метод: Серию разведений клеточного лизата 293T, начиная с 10 мкг/лунку, наносили на гели Bolt 4–12% Bis-Tris-Plus и подвергали электрофорезу при 200 В в течение ~20 мин. Гели переносили на нитроцеллюлозные мембраны с помощью устройства для переноса геля iBlot 2 (протокол P0 в течение 7 мин). Иммуноблотинг обрабатывали с использованием автоматизированного процессора вестерн-блоттинга Bandmate. Мембраны блокировали 5% BSA (PBS), 5% обезжиренного молока (PBS), 1% казеина (PBS) или блокирующим буфером StartingBlock. Мембраны исследовали с помощью Rabbit Anti-Hsp9.0 (1:5000, № по каталогу MA1-10372), разбавленным соответствующим блокирующим буфером. За этим последовала инкубация с HRP-конъюгированным козьим антикроличьим IgG (1:1000 или 0,01 мкг/мл, кат. № 32460). Детекцию хемилюминесценции проводили с использованием хемилюминесцентного субстрата SuperSignal West Pico PLUS. Мембраны визуализировали в системе визуализации iBright.

При обнаружении Hsp90 в большом количестве в лизатах клеток 293T все испытанные блокирующие буферы обеспечивали приемлемые отношения сигнал/шум. 5% БСА демонстрировал более высокий уровень неспецифического связывания с антителами для обнаружения, но обеспечивал хорошую чувствительность.

Выберите, когда	Thermo Scientific Product	Блокирующий агент	Основные моменты	Когда используют	Доступные форматы
Химилминс. Вестерн
ХИМИЛЕМИНА	Блокирующий буфер StartingBlock	Отдельный очищенный белок, не содержащий сыворотки и биотина	Хорошо работает с широким спектром антител и комбинаций антител Совместим со стрептавидиновыми системами Блокирует менее чем за 15 минут и повторное исследование вестерн-блотов	PBS TBS PBST TBST
Традиционные блокаторы не обеспечивают достаточной чувствительности	Блокирующий казеин	Очищенный казеин	Высокоэффективная замена самодельным блокирующим буферам для молока Однобелковый блокирующий буфер обеспечивает меньшую вероятность перекрестной реакции с компонентами анализа, чем растворы сыворотки или молока	PBS TBS
Targeting phosphoproteins or need highest level of sensitivity	Blocker BSA	Purified BSA	10% solution of high-quality BSA Single purified protein provides fewer chances of cross- реакция с компонентами анализа, чем растворы сыворотки или молока	Использование при нацеливании на фосфопротеины Лучше всего использовать при хранении повторно используемых антител в блокаторе	10x концентрат PBS 10x TBS концентрат
Флуоресцентный вестерн -блоттинг. Блокирует избыточные сайты неспецифического связывания, помогая уменьшить фоновую флуоресценцию Работает как с нитроцеллюлозными мембранами, так и с мембранами из ПВДФ с низкой флуоресценцией Не содержит моющих средств Блоки за 15–30 минут	Визуализация и хранение сухих флуоресцентных блотов	10-кратный концентрат

Дополнительные доступные блокирующие буферы

	Blocking agent	Highlights	When to use	Available formats
Pierce Clear Milk Blocking Buffer	Очищенные и стабилизированные молочные белки	Высокоэффективная замена буферов для блокировки молока домашнего приготовления Длительный срок хранения при комнатной температуре хемилюминесцентные применения	Борат, pH 7,6
Блокирующий буфер для рыбьей сыворотки	Сыворотка стального лосося	Useful in detection methods involving mammalian samples Particularly effective in applications involving multiplex fluorescence imaging	With mammalian samples Multiplexing fluorescence western blotting	PBS
SuperBlock Blocking Buffer	Одноочищенный очищенный гликопротеин, не содержащий сыворотки и биотина	Состав на основе белка не содержит иммуноглобулинов, альбумина или эндогенного биотина, что делает его совместимым во многих ситуациях, когда традиционные блокирующие агенты не действуют Biotin-free for use with streptavidin system Blocks in less than 10 minutes	High background with current blocking buffer	PBS TBS PBST TBST
Blocker BLOTTO	Молоко сухое обезжиренное	Готовый к употреблению 5% раствор обезжиренного сухого молока	Готовый к употреблению удобный продукт Более стабильный продукт по сравнению с самодельными блокаторами	TBS
Блокирующий буфер, не содержащий белков	Соединение, не блокирующее белки Комбинации «образец-антитело» требуют устранения всех возможных экзогенных белков животного происхождения в системе анализа, чтобы избежать перекрестной реакции или подавления желаемой функции зонда желаемая функция датчика	PBS TBS PBST TBST
Pierce Fast Blocking Buffer	Single purified protein	Blocks in 5 minutes	When time is essential	TBS

Дополнительные ресурсы

Справочник: Справочник по западному блоттингу
Справочник: Research Brotein

Вебинары по Вестерн-блоттингу

Реагенты BD Fc Block™

Fcγ-рецепторы принадлежат к суперсемейству иммуноглобулинов и экспрессируются на разных уровнях несколькими линиями клеток, включая миелоидные и В-клетки. Различные типы рецепторов Fc модулируют различные в первую очередь защитные иммунные ответы при агрегации поливалентными комплексами антиген-антитело. Несмотря на их важную физиологическую роль в иммунной системе, Fc-рецепторы также могут неспецифически связываться с детектирующими антителами в таких приложениях, как проточная цитометрия, вызывая ложноположительный сигнал во время анализа.

BD Biosciences предлагает набор изотип-специфичных очищенных рекомбинантных Fc-белков, которые блокируют неспецифическое связывание Fc-рецепторов с антителами.

Протокол иммунофлуоресцентного окрашивания лейкоцитов мыши и крысы

I. Процедура

Соберите клетки из ткани, приготовив суспензию одиночных клеток. Эритроциты могут быть удалены путем лизиса или градиента плотности. Эритроциты из периферической крови мышей или суспензии клеток селезенки можно лизировать с помощью лизирующего буфера BD Pharm Lyse™. Добавьте 2,0 мл лизирующего буфера 1X в суспензию клеток селезенки или на 200 мкл мышиной периферической крови. Аккуратно перемешайте на вортексе сразу после добавления лизирующего раствора. Инкубировать при комнатной температуре в защищенном от света месте в течение 15 мин. Центрифуга 200 х г за 5 мин. Тщательно аспирируйте и утилизируйте супернатант, не нарушая осадок. Ресуспендируйте осадок в 1X буфере для холодной промывки (PBS/0,1% NaN3/1,0% эмбриональной бычьей сыворотки). Центрифуга при 350 х г в течение 5 мин. Наконец, ресуспендируйте клеточный осадок до концентрации 2 x 10 ⁷ клеток/мл (т. е. 10 ⁶ клеток на 50 мкл).
Разбавьте первичные mAb (например, неконъюгированные, биотинилированные или конъюгированные с флуорохромом mAb) до заданных оптимальных концентраций (см. Советы по окрашиванию) в промывочном буфере и доставьте в лунки планшета для микротитрования с U-образным дном в объеме 50 мкл.
Внесите 10 ⁶ клеток по 50 мкл в каждую лунку, уже содержащую 50 мкл mAb (или 50 мкл промывочного буфера для отрицательного контроля). Смешайте, осторожно вортексируя или постукивая.
Инкубировать при 4 °C в течение 20–40 мин в темноте.
Промыть 2 раза 200 мкл промывочного буфера (или 3 раза, если используется первичное антитело, конъюгированное с биотином). После каждого центрифугирования, 350 x g в течение 5 мин, аспирируйте лунки или переверните планшет для удаления надосадочной жидкости. Аккуратно вортексируйте или постучите по планшету, чтобы разрыхлить осадок перед добавлением следующей промывки или разбавленного вторичного реагента.
Если необходим реагент второго этапа, ресуспендируйте клеточный осадок в 100 мкл соответствующим образом разбавленного вторичного реагента (например, авидин, конъюгированный с флуорохромом, стрептавидин, анти-Ig аллотип, анти-Ig изотип, поликлональные анти-Ig). Например, разбавьте антитело до ~ 1 мкг на 100 мкл в промывочном буфере и добавьте его в каждую лунку, содержащую разрыхленный клеточный осадок.
Инкубировать при 4 °C в течение 20–40 мин в темноте.
Промыть 2 раза 200 мкл промывочного буфера, как на шаге 5. Используйте 100 мкл промывочного буфера для переноса осадка клеток в аликвоты 0,4 мл промывочного буфера (конечная концентрация ~10 ⁶ клеток в 0,5 мл) в пробирках, подходящих для проточного цитометра. Получите данные образца на проточном цитометре как можно скорее после окрашивания. (см. Совет по окрашиванию 5.)

II. Советы по окрашиванию

Определите оптимальные концентрации (наиболее яркое окрашивание/наименьший фон) каждого первичного и вторичного антител путем титрования от 1,0 мкг до 0,1 мкг антитела на 100 мкл промывочного буфера для 10 ⁶ клеток в предварительном эксперименте.
При выполнении многоцветной маркировки непосредственно конъюгированные mAb можно добавлять одновременно, а не последовательно. Описание настройки прибора см. в разделе «Процедура установки компенсации для многоцветного проточного цитометрического анализа».
Для снижения опосредованного FcgII/IIIR связывания антител (или связывания Sav-PE или Sav-Cy-chrome), которое может способствовать возникновению фона, использование очищенных крысиных анти-мышиных CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) или Рекомендуется очищенный мышиный анти-крысиный CD32. Реагент BD Fc Block™ можно добавлять к клеткам (<1 мкг на миллион клеток, 3–5 мин, 4 °C), и его не нужно смывать перед добавлением первичного mAb. Убедитесь, что вторичный реагент не связывает реагент BD Fc Block™. См. легенду к рисунку в разделе «Использование реагента BD Fc Block™ для иммунофенотипирования лейкоцитов мышей и крыс».
Для маркеров клеточной поверхности с очень низкой плотностью (например, рецепторов цитокинов) трехэтапный протокол может усилить окрашивание. Используйте очищенное первичное антитело (этапы 2–4 вышеописанной процедуры), биотинилированные анти-Ig на втором этапе (этапы 6–7 выше) и авидин или стрептавидин, конъюгированные с флуорохромом, на третьем этапе (повторите этапы 6–7).
Мы обнаружили, что свежевыделенные лейкоциты и клеточные линии могут ожидать анализа в промывочном буфере при 4 °C без фиксации до 18 часов после окрашивания без потери жизнеспособности. Активированные лимфоциты могут быстро терять жизнеспособность, и данные следует собирать в течение 5 часов после окрашивания. Для сохранения целостности клеток за пределами этих временных рамок может потребоваться фиксация параформальдегидом. Однако возможно, что качество окрашивания может быть снижено при такой фиксации. Мы не рекомендуем фиксацию окрашенных клеток, за исключением случаев, когда существует возможность контакта с биологически опасным материалом.
Каждый эксперимент должен включать элементы управления. Отрицательные контроли представляют собой образцы той же клеточной популяции, обработанные точно так же, как и тестируемый образец, но с пропуском или модификацией одного из этапов окрашивания.
Блок фбс 5 размеры: Купить ФБС 5 от Амега-Бетон в Уфе по низким ценам